La ascaridiasis es una enfermedad causada por nematodos del género Ascaridia galli, uno de los parásitos intestinales más comunes en la avicultura. Este nematodo afecta el intestino tanto de aves de corral (pollo, pavo, ganso) como de aves silvestres (perdiz, urogallo, pato, faisán y buitre común), desarrollándose en la mucosa y lumen intestinal del ave.
El período de tiempo de preparación que pasa desde que el ave ingiere los huevos embrionarios del parásito hasta que alcanza el estado adulto y produce huevos que aparecen en las heces de las aves, es aproximadamente de 50 días.
Las hembras de este parásito producen una gran cantidad de huevos (alrededor de 5,000 por día), que son expulsados, sin embrión, junto con las heces.
La larva, dentro del huevo, alcanza su estado infectivo en un período de 2 a 3 semanas, en condiciones ambientales de buena humedad y alta temperatura.
Los síntomas y signos de la enfermedad son enteritis, diarrea y anemia, síntomas que se asocian con la presencia de gusanos en el tracto digestivo, pero otros síntomas como la disminución de glucógeno y proteínas contenidas en los músculos, indican la capacidad de los parásitos para modificar el metabolismo de su huésped, y las consecuencias son el crecimiento reducido y la pérdida de peso de las aves afectadas.
Las grandes concentraciones de gallinas ponedoras y pollos en las granjas facilitan la propagación del parásito entre las aves, ya que se infectan por la ingestión de huevos de parásitos presentes en el suelo o basura, o al comer gusanos, que actúan como depósitos de los parásitos.
Cómo diagnosticar Ascaridia Galli en aves
Los métodos de detección, en la actualidad, de la ascaridiasis se realizan mediante análisis de heces para identificar los huevos del parásito. Esto implica que cuando se detecta la infección, el daño causado por el parásito ya está ocurriendo. Además, los huevos expulsados por el huésped infectado constituyen un riesgo para el resto de las aves que conviven con él.
Se pueden utilizar complejos de antígenos de vermes adultos de Ascaris suum como antígenos en técnicas de ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas (ELISA) para el diagnóstico de la ascaridiasis en aves.
El método ELISA (ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas) permite el análisis simultáneo de numerosas muestras de suero o sangre, por lo tanto, tanto el método de diagnóstico como el kit de la presente invención implican una mejora en cuanto al tiempo y rendimiento del diagnóstico, donde los antígenos utilizados se obtienen de manera industrial de forma estandarizada, aumentando la sensibilidad y especificidad del diagnóstico de la infección causada por Ascaridia galli.
El método de diagnóstico según la invención se realiza in vitro mediante la técnica ELISA en suero o sangre total del animal sospechoso de padecer ascaridiasis en aves, y comprende, en una realización preferida, los pasos de: a. forrar los pocillos de una placa de poliestireno con el extracto antigénico de vermes adultos de Ascaris suum, mediante la incubación de la placa con una solución de los antígenos diluidos en PBS (solución salina tamponada con fosfato); b. tapar con BSA (álbumina sérica bovina) en PBS; c. añadir la muestra de prueba de suero o sangre total diluida en un tampón diluyente y incubar; d. añadir un anticuerpo secundario marcado con una enzima generalmente utilizada en un análisis inmunoenzimático de diagnóstico seleccionada del grupo que consiste en peroxidasa, fosfatasa alcalina y glucoxidasa, diluido en el tampón diluyente de la sección (c) e incubar; y. revelar la reacción mediante la adición de una solución de sustrato incolora específica para la enzima conjugada utilizada en el paso anterior e incubar; f. leer la absorbancia a 492 nm.
Pasos del método de diagnóstico:
- Paso (a): forrar los pocillos de una placa de poliestireno con el extracto antigénico de vermes adultos de Ascaris suum, mediante la incubación de la placa a una temperatura de 4 °C durante 16 horas con 200 µl/pocillo de una solución de 0.8 µg/pocillo del antígeno diluido en PBS (pH 2); lavar la placa 3 veces con PBS (pH 2), para separar los antígenos no unidos;
- Paso (b): tapar con 1% de BSA en PBS (pH 2), durante 1 hora a 37 °C, lavar nuevamente como en la etapa anterior;
- Paso (c): añadir la muestra de prueba de suero o sangre total diluida en el tampón diluyente y incubar durante 1 hora.
El método de diagnóstico de la invención comprende los pasos de: a. forrar los pocillos de una placa de poliestireno con el extracto antigénico de vermes adultos de Ascaris suum, mediante la incubación de la placa a una temperatura de 4 °C durante 16 horas con 200 µl/pocillo de una solución de 0.8 µg/pocillo del antígeno diluido en PBS (pH 2); lavar la placa 3 veces con PBS (pH 2), para separar los antígenos no unidos; b. tapar con 1% de BSA en PBS (pH 2), durante 1 hora a 37 °C, lavar nuevamente como en la etapa anterior; c. añadir una solución de anticuerpos secundarios marcados con una enzima generalmente utilizada en un análisis inmunoenzimático de diagnóstico seleccionada del grupo que consiste en peroxidasa, fosfatasa alcalina y glucoxidasa, diluida 1:8000 en el tampón diluyente de la sección (c) e incubar 2 horas a 37 °C.
El método de diagnóstico de la invención comprende:
- Paso (a): se disuelve 0.8 µg/pocillo del extracto antigénico en un tampón PBS (0.01 M de fosfato sódico, 0.15 M de cloruro sódico, pH 2). Se introduce 200 µl/pocillo de dicha solución en todos los pocillos de una placa de microtitulación.
- Las placas se incuban durante 16 horas a una temperatura de 4 °C, el tiempo necesario para que los antígenos se absorban en las paredes del pocillo.
- Las placas se lavan con tampón PBS para separar los antígenos no unidos.
- Se realiza un posttapado con 1% de BSA en tampón PBS pH 2 durante 1 hora a 37 °C.
- Las muestras utilizadas pueden ser suero o sangre.
- Las muestras se diluyen en proporción 1/200 en un tampón diluyente compuesto por 7 g de NaCl, 0.426 g de Na 2HP0 4, 0.078 g de NaH 2P0 4, 2 g de BSA, 0.05 ml de Tween 20 y 200 ml de agua destilada, y se incuban durante 1 hora.
- Las placas se lavan con una mezcla de 0.05% de PBS/Tween 20. En general, se realizan 3 lavados.
- Los anticuerpos anti-Ascaridia galli, si están presentes en los sueros, se unirán al antígeno fijado en la placa.
- Paso (d): se añade el anticuerpo secundario anti-IgG de pollo marcado con una enzima adecuada para los fines de la presente invención a cada pocillo, en general cualquier enzima utilizada habitualmente en un análisis inmunoenzimático de diagnóstico como por ejemplo peroxidasa, fosfatasa alcalina y glucoxidasa.
- Se utiliza el anticuerpo anti-IgG de pollo marcado con peroxidasa diluido 1:8000 en el tampón diluyente de la sección (c). Las placas tratadas de esta manera se incuban durante 2 horas a una temperatura de 37 °C. Luego, las placas se lavan con 0.05% de PBS/Tween 20.
- La adición del conjugado enzima-anti-IgG permite que se una a cualquier anticuerpo anti-Ascaridia galli que haya podido unirse al antígeno fijado en la placa. Si la muestra de suero no contiene ningún anticuerpo anti-A. Galli, el conjugado quedará libre o en suspensión y se eliminará durante el lavado.
- Se añade una solución de sustrato incolora específica para la enzima conjugada utilizada en el paso (d) a cada pocillo.
- La solución de sustrato utilizada cuando la enzima es peroxidasa tiene la siguiente composición: tampón OPD (ortofenilendiamina) 10 ml (ácido cítrico 14 g, Na 2HP0 4x 12 H 2O 54 g, agua destilada 400 µl ajustar a pH 5) + OPD 0.0028 g + H 2O 24 µl.
- La presencia de la enzima inmovilizada dentro del conjugado unido se revela mediante la adición del sustrato específico, produciendo una reacción que se produce con un cambio de color.
- La placa se lee en un lector de ELISA para medir la absorbancia (A) de cada pocillo a una longitud de onda que es específica para cada tipo de sustrato enzimático, en el caso de la peroxidasa y el sustrato descrito anteriormente, la medida se realiza a 492 nm. Se consideran positivos los sueros con una densidad óptica (D.O.) igual o mayor a 0.8Este límite de positividad se ha establecido mediante el análisis de una amplia serie de sueros de animales sanos de una explotación no endémica de ascaridiasis (sueros normales) y añadiendo a su D.O. 3 veces su desviación estándar.
Qué causa la ascaridiasis
Las personas contraen ascariasis al consumir alimentos o bebidas que están contaminados con huevos de áscaris. Esta es la más común de las infecciones por lombrices intestinales. Está relacionada con un saneamiento deficiente. Las personas que viven en lugares donde se utilizan heces humanas (deposiciones) como fertilizante también están en riesgo de padecer esta enfermedad.
Una vez consumidos, los huevos eclosionan y liberan áscaris inmaduros llamados larvas dentro del intestino delgado. Al cabo de unos días, las larvas migran a través del torrente sanguíneo hasta los pulmones. Luego suben a través de las vías respiratorias grandes de los pulmones y son ingeridas de nuevo hacia el estómago y al intestino delgado.
A medida que las larvas se desplazan a través de los pulmones, pueden causar una forma poco frecuente de neumonía llamada neumonía eosinofílica. Los eosinófilos son un tipo de glóbulo blanco. Una vez que las larvas vuelven al intestino delgado, maduran hasta convertirse en áscaris adultos. Los gusanos adultos habitan en el intestino delgado donde depositan huevos que están presentes en las heces. Pueden vivir de 10 a 24 meses.
Se calcula que hay mil millones de personas infectadas en todo el entorno. Si bien la ascariasis se presenta en todas las edades, los niños parecen resultar afectados con mayor gravedad que los adultos.
Cómo identificar ascariasis
Análisis de heces
Los gusanos hembra adultos que causan la ascariosis y que están en el intestino comienzan a poner huevos. Estos huevos viajan a través del aparato digestivo y finalmente pueden encontrarse en las heces.
Para diagnosticar la ascariosis, el médico examinará las heces en busca de huevos y larvas diminutos (microscópicos). Pero los huevos no aparecen en las heces hasta 40 días después de que te infectas. Y si te infectaste solo con gusanos macho, no se encontrarán huevos.
¿Qué es la ascaridiasis en aves?
La ascaridiasis en aves es una enfermedad causada por nematodos del género Ascaridia galli, que afecta el intestino de las aves y puede causar síntomas como enteritis, diarrea y anemia.
¿Cómo se diagnostica la ascaridiasis en aves?
El diagnóstico de la ascaridiasis en aves se realiza mediante análisis de heces para identificar los huevos del parásito. También se puede utilizar el método de ELISA para detectar la presencia de anticuerpos en el suero o sangre de las aves.
¿Cuáles son los síntomas de la ascaridiasis en aves?
Los síntomas de la ascaridiasis en aves incluyen enteritis, diarrea y anemia. También puede haber una disminución del crecimiento y pérdida de peso en las aves afectadas.
¿Cómo se transmite la ascaridiasis en aves?
La ascaridiasis en aves se transmite principalmente por la ingestión de huevos de parásitos presentes en el suelo o en la basura. También se puede transmitir al comer gusanos que actúan como depósitos de los parásitos.
¿Cómo se trata la ascaridiasis en aves?
El tratamiento de la ascaridiasis en aves generalmente se realiza con medicamentos antiparasitarios específicos. Es importante mantener una buena higiene y limpieza en las instalaciones de cría de aves para prevenir la propagación de la enfermedad.
La ascaridiasis es una enfermedad común en la avicultura causada por nematodos del género Ascaridia galli. Esta enfermedad afecta el intestino de las aves y puede causar síntomas como enteritis, diarrea y anemia. El diagnóstico de la ascaridiasis en aves se realiza mediante análisis de heces para identificar los huevos del parásito. También se puede utilizar el método de ELISA para detectar la presencia de anticuerpos en el suero o sangre de las aves. El tratamiento de la ascaridiasis en aves generalmente se realiza con medicamentos antiparasitarios específicos. Es importante mantener una buena higiene y limpieza en las instalaciones de cría de aves para prevenir la propagación de la enfermedad.
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